如何切出理想的石蠟切片

                        如何切出理想的石蠟切片

                         

                        石蠟切片是組織學常規制片技術中應用廣泛的方法。但在石蠟切片過程中,經常會遇到一些問題:修整蠟塊總修不平整?切片時容易碎片、翻卷?攤片時總是鋪不平整?

                        1.正確固定

                          ·  組織離體后,必須在1小時內固定。

                          ·  固定液須是組織體積的4-10倍,濃度準確,過稀或過濃都會影響組織形態和固定效果。如發現固定液變質,如甲醛液體產生白色沉淀,應立即更換。

                          ·  固定溫度宜室溫或放于35-37℃的全封閉組織處理機內,溫度過高,會加快組織自溶和過度收縮,破壞細胞內的抗原和DNA。

                          ·  固定時間不超過40小時,根據室溫和標本不同而調整。

                        2.恰當脫水

                        脫水的關鍵是使低濃度的酒精脫水時間和高濃度酒精脫水時間正確搭配。低濃度酒精可以使組織收縮減少,更好切;高濃度酒精使組織脫水更徹底。

                        一般情況下,標本脫水時間(35℃)為:75%酒精1.5小時、85%酒精2小時、95%酒精(2次)各1.5至2小時、純酒精(2次)各1.5至2小時。小標本脫水時間與大標本差異不大,一般沒必要分開(小標本發脆往往是紙包太厚或相互粘在一起,組織脫水不徹底引起的。如果時間緊急,也可適當縮短脫水時間,脫水時間長短,與室溫高低密切相關,同時也與組織的厚薄、組織類型、組織固定的程度等條件有關)。

                         

                        脫水是否徹底,直接關系到組織是否能充分透明。如果脫水時加溫過高(超過50℃),或使用丙酮等,容易導致組織收縮過度和組織發硬發脆。組織脫水引起的組織發脆有三種原因:

                          ·  組織固定不佳,酒精起到固定作用,從而引起組織質地發生改變。

                          ·  組織本身質地因素,如小動物肝臟,在切片時溫度過低導致。

                          ·  假脆,由于脫水不足,組織在浸蠟時,蠟無法滲透到組織中去,組織在高溫下“干烤”導致發硬發脆,切片會出現粉粉的或一絲絲的現象,子宮肌瘤等較硬的組織還會有一棱棱的現象,甚至會整塊往外崩;嚴重脫水不足的組織中間發軟,甚至還會有水。

                        3.石蠟切片操作要點

                          ·  切片前,把切片機上相關鎖桿或螺旋擰緊,否則可能出現跳片、切片厚薄不均現象。

                          ·  刮凈包埋盒周邊的余蠟,否則樣品夾持可能松動,影響切片質量。

                          ·  正確修塊,先粗修,厚度大約在15-30微米,質地較硬的組織或較小的組織應再薄一些。粗修至組織全部暴露后,再進行細修。

                          ·  選擇蠟塊冷凍方式,冰盒優于冷凍臺。使用冰盒能加水潤濕蠟塊,冷凍速度快,體積小,使用成本低,無須外接電源。

                          ·  切片時輕握手輪,用力均勻輕柔,搖速不宜過快或過慢。過快會導致切片厚薄不均,切片難以展開;過慢會使切片增厚。切片要求完整、薄、均勻。

                        在切片后,先把切片放入冷水,再移至熱水,這樣片子會較薄,皺褶和氣泡也少。展片水溫應在42-55℃之間,這和包埋蠟的熔點有關。水溫過高,會引起組織細胞散開,水溫過低,切片皺褶無法攤平。

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